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兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)

簡(jiǎn)要描述:

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更新時(shí)間:2024-08-28;廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商;覽量:1691

服務(wù):
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產(chǎn)品名稱(chēng):兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)
英文名稱(chēng):Rabbit endothelial nitric oxide synthase (eNOS) ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T(兩種規(guī)格)
檢測(cè)方法:酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)
保存條件:2-8
產(chǎn)品性狀:液體盒裝
產(chǎn)品價(jià)格:含稅含運(yùn)費(fèi),我們?nèi)烫峁?/span>ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)和ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)。
兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)技術(shù)交流:

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml4 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37 孵育0.51小時(shí),洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37 1030分鐘。
5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6
、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀(guān)察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml 每孔加0.1ml,4過(guò)夜。次日洗滌3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,37孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3
、加酶標(biāo)抗體:于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,37孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37 1030分鐘。
5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6
、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀(guān)察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。
4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
10.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
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溫馨提示:使用前,請(qǐng)*閱讀說(shuō)明書(shū)。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

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