岛国激情视频小说在线观看_极品美女销魂一区二区三区初夜_可以看黄的免费网站_日本A级黄色_亚洲熟女性性爱视频_久久六十熟女视频_亚洲免费激情成人小说_丁香 成人 激情_日韩做爰xxxⅹ性生交_黄色片网站哪里看在线观看_牛牛 av网站_久操爆操在线_萌白酱视频一区二区免费_啊....好大...啊好满想被c足在线观看_这里只有精品成人在线

(一)原理

   以NK細胞為例。將待測者外周血中的NK細胞與靶細胞(K562細胞)按一定比例混合培養(yǎng)一定時間，NK細胞作用于靶細胞，使靶細胞被殺死、破壞，進而使靶細胞線粒體內的乳酸脫氫酶釋放出來．使底物發(fā)生顏色變化，其顏色深淺與酶的釋放量成正比，檢測顯色后的光密度OD值，便可推算出NK細胞的殺傷活性。

(二)材料

1．待檢者肝素抗凝血，靶細胞為K562細胞。

2．RPMI 1640培養(yǎng)液、淋巴細胞分離液。

3．酶標儀、離心機。

(三)方法

1．用含5％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液將靶細胞調整到5×104～2×105／ml，此濃度需根據(jù)情況預先標定。

2．取待檢者肝素抗凝血3～5ml，經淋巴細胞分離液分離單個核細胞，為效應細胞。

3．在96孔圓底細胞培養(yǎng)板中加入靶細胞，每孔加100μl。3個效應細胞自然釋放對照孔不加靶細胞．只加100μl培養(yǎng)液。

4．向各孔加：100μl效應細胞，效應細胞與靶細胞的比例根據(jù)要求而定，通常為5：l～20：1。自然釋放孔不加效應細胞只加100μl培養(yǎng)液，zui大釋放孔中加100μl1％NP40。每個實驗設3個復孔。

5．置37℃5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6h。

6．離心培養(yǎng)板1000r／min離心10min。每孔吸出150μl上清液．對應加入另一塊96孔酶聯(lián)檢測板中。向第二塊板每孔依次加20μl O．4mol／L乳酸溶液、20ml 4mmol／L 2一p一碘苯酯一3一p一氯化硝基苯四唑，20μl反應液[含O．03％BSA．2．7U／m1硫辛酰胺脫氫酶．4．5mmol／L氫化型輔酶I(NAD+ )，1．2％蔗糖的PBS]，室溫中放置20min。

7．在酶聯(lián)檢測儀上測定各孔的光密度(OD值)，檢測波長492nm，參考波長650nm；